CD项目简介：

说明：蛋白二级结构分析技术-圆二色（CD）测试分析是测试+分析一体化服务产品，根据样品信息和分析目的综合开发测试方法，从更专业的角度给到更加符合样品实际情况的分析报告。报告内容包括测试参数、测试方法、分析方法简介、分析结果和扩展资料。

技术简介：圆二色性(circular dichroism, CD)，是指平面偏振光通过具有旋光性的介质时，由于介质中同一种旋光活性分子存在手性不同的两种构型，而它们对平面偏振光所分解成的右旋和左旋圆偏振光的吸收系数不同，射出时电场矢量不是圆偏振光，而是椭圆偏振光，从而产生圆二色性。CD谱利用手性化合物对左右圆偏振光吸收系数的不同和测定吸收系数之差随波长的变化来确定手性化合物的绝对构型。典型的圆二色谱有一个波谷和一个波峰，较长波长处的吸收称为第一cotton效应，较短波长处的吸收为第二Cotton效应，每种构型对应特定的CD谱，可以根据CD谱中的Cotton效应来分析手性分子的立体构型。原则上，使用ECD方法确定绝对构型时，将计算得到的ECD谱图与实验ECD谱图进行对比，从而得出化合物的绝对构型。此外，蛋白的圆二色谱与其骨架结构中的分子构型及相互作用密切相关，CD谱也成为研究蛋白质等大分子与配基相互作用的有力工具。

        与其他技术相比，CD提供的结构信息相对较简单，但其测定操作简便、所需样品量极少、可在稀溶液中测定、没有分子量或分子大小的限制且测定时间很短，使其在物质结构鉴定和研究中起着决定性的作用。CD一般可以用来：
1、CD谱对溶液中蛋白质的二级及三级结构变化高度灵敏，能检测到其微小的改变，是判断蛋白及多肽等生物大分子二级结构的重要手段。
2、将计算得到的ECD谱图与实验ECD谱图进行对比，可得出化合物的绝对构型（需要进行模拟计算）。
3、CD还可判断核酸等生物大分子的构象变化，探究生物大分子与小分子化合物间相互作用。

CD测试方法汇总：

液体CD测试：蛋白类样品一般稀释到0.2mg/ml，用去离子水或者客户提供的溶剂进行稀释，然后上机测试；

测试参数：以日本JASCO 1500为例

蛋白分析二级结构常规的测试范围为190-260nm（分析蛋白的二级结构一般需要190-240nm数据。

扫描速率:0-100nm/min；狭缝宽度:1-2nm；DIT时间：1-4s。

样品要求：

样品要求：
a）样品必须保持一定的纯度，推荐蛋白浓度为0.2mg/ml。如添加其它物质徐提前确保在测试波长范围内没有强吸收（紫外吸收值最好低于2）。
b）样品能完全溶解在溶剂中， 形成均一透明的溶液，样品如有悬浮或沉淀，则需过滤或离心以除去沉淀；
c）在测定的光谱范围内，样品的吸光度值不应超过2.0，最优信噪比的吸光度值为0.86；
e）薄膜样品：可以是透明的无机固体薄膜，也可以是有机高分子薄膜；
f）缓冲液与溶剂要求：缓冲液和溶剂在配制溶液前要做单独的检查，看是否在测定波长范围内有吸收干扰， 看是否形成沉淀和胶状；在蛋白质测量中，经常选择透明性极好的磷酸盐作为缓冲体系。缓冲液浓度最好不超过5mM，不然可能会影响190-200nm数据

蛋白二级结构分析：

液体CD测试：蛋白类样品一般稀释到0.2mg/ml，用去离子水或者客户提供的溶剂进行稀释，然后上机测试；

测试参数：以日本JASCO 1500为例

蛋白分析二级结构常规的测试范围为190-260nm（分析蛋白的二级结构一般需要190-240nm数据。

扫描速率:0-100nm/min；狭缝宽度:1-2nm；DIT时间：1-4s。

样品要求：

样品要求：
a）样品必须保持一定的纯度，推荐蛋白浓度为0.2mg/ml。如添加其它物质徐提前确保在测试波长范围内没有强吸收（紫外吸收值最好低于2）。
b）样品能完全溶解在溶剂中， 形成均一透明的溶液，样品如有悬浮或沉淀，则需过滤或离心以除去沉淀；
c）在测定的光谱范围内，样品的吸光度值不应超过2.0，最优信噪比的吸光度值为0.86；
e）薄膜样品：可以是透明的无机固体薄膜，也可以是有机高分子薄膜；
f）缓冲液与溶剂要求：缓冲液和溶剂在配制溶液前要做单独的检查，看是否在测定波长范围内有吸收干扰， 看是否形成沉淀和胶状；在蛋白质测量中，经常选择透明性极好的磷酸盐作为缓冲体系。缓冲液浓度最好不超过5mM，不然可能会影响190-200nm数据